乳腺癌耐藥細胞株是脂質體轉染后,單克隆篩選穩(wěn)定細胞株.另外一種是應用逆轉錄病毒,慢病毒轉染,篩選穩(wěn)定
乳腺癌耐藥細胞株.
乳腺癌耐藥細胞株的脂質體轉染：在轉染24小時后,消化細胞并計數.將細胞種到96孔板,保證每個孔2-3個細胞,這樣才能得到單克隆.待細胞貼壁后,加入抗生素篩選.篩選時間和濃度視細胞而定.一般G418一個星期作用,嘌呤霉素2-3天.脂質體法篩單克隆時間較長,且效率低,大概只有1%.病毒轉染：先要用包裝細胞,一般為293細胞,包裝出病毒,再用病毒轉染目的細胞.包裝病毒視不同類型的病毒而定,一般要3-5天的時間.包裝好的病毒要測滴度,根據滴度決定轉染目的細胞的病毒量.轉染目的細胞1-2天后加抗生素篩選得到穩(wěn)定細胞株.病毒轉染得到穩(wěn)定乳腺癌耐藥細胞株的效率高,只是步驟繁瑣.
技術原理穩(wěn)定表達細胞株（穩(wěn)轉細胞株）指在細胞中持續(xù)穩(wěn)定表達特定基因或干擾特定基因表達。穩(wěn)轉乳腺癌耐藥細胞株的目的基因質粒DNA整合到細胞染色體上，使細胞長期穩(wěn)定表達該基因。用轉染質粒或病毒侵染的方法將構建好的含靶基因的載體導入細胞，根據不同的基因載體中所含的抗性標志選用相應的藥物進行篩選混合陽性克隆。在陽性混合克隆的基礎上，得到單細胞長出的陽性單克隆，繼而得到穩(wěn)定轉染乳腺癌耐藥細胞株。常用的真核表達載體的抗性標志物有嘌呤霉素（puromycin）、潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin）。
