熒光定量PCR是(realtimefluores-cencequantitativePCR,RTFQPCR)是1996年由美國AppliedBiosystems公司推出的一種新定量試驗技術,
熒光定量PCR是通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針,對PCR產物進行標記跟蹤,實時在線監控反應過程,結合相應的軟件可以對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。
PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時,探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時,Taq酶的5'端-3'端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。
實時熒光定量PCR的出現,極大地簡化了定量檢測的過程,而且真正實現了定量。多種檢測系統的出現,使實驗的選擇性更強。自動化操作提高了工作效率,反應快速、重復性好、靈敏度高、特異性強、結果清晰。隨著生物芯片技術和熒光探針定量技術的結合,熒光定量PCR在醫學檢測及其他各個領域中的應用前景將更加廣闊,令人欣喜。盡管如此我們也應清晰認識到,FQ-PCR技術在我國各個研究領域的應用并不多見,這就需要我國學者迎頭趕上,使FQ-PCR技術更充分地推廣,以推動研究工作的快速發展。