ELISA試劑盒以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。

　　

　　ELISA試劑盒實驗中每一個步驟都尤為重要，細節不容忽視，它是實驗成功的關鍵與否，以下是小編為您整理的部分注意事項：

　　

　　1.吸取液體時速度不易太快，以免產生氣泡，吸取的量不夠準確。

　　

　　2.手工洗板時每次加入洗滌液后。應靜置15～30s，不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。

　　

　　3.加樣后及時放人孵箱，標本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。

　　

　　4.作時必須戴手套，穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度。

　　

　　5.同批號試劑組分不得混用。

　　

　　6.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

　　

　　7.要確保微量加樣器的準確性，可以使用蒸餾水和電子天平進行確定，每一把微量加樣器都應該將其zui高量程和zui低量程進行確定。

　　

　　8.在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標準品溶液。

　　

　　9.檢驗技師應具備從事實驗室操作的基本素質和實踐經驗。能熟練操作實驗儀器、器械，具有一定總結和分析問題的能力，對實驗中出現的意外情況能及時妥善解決。

　　

　　10.操作前仔細閱讀說明書，嚴格按照說明書要求進行規范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方，反復試驗確定成立后才能改進，比如洗板次數的掌握等。

　　

　　11.評估試劑的實用性，試劑的穩定與否，對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗，判定試劑符合要求后方可使用。

　　

　　12.加樣要準確、快速。加樣不準確，酶生成物的量不能確定，直接影響顯色結果。另外，顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關，所以加樣應慎重。要求在一定時間內加樣完畢的實驗，如果加樣遲緩，便出現誤差，而且試劑長時間暴露在外，尤其室溫過高時，保存期會縮短甚至失效。

　　

　　13.使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要

　　

　　14.嚴格掌握顯色時間，顯色時間過短，加入終止液反應終止后，底物結合物的量過少，易出現假陰性。超過顯色要求時間后顯色，應判為假陽性，這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色，不可報陽性，這可能是本底顯色的結果。

　　

　　15.洗滌*，洗板不*，酶結合物本底顯色會呈現假陽性。另外，洗滌液要新鮮，現用現配，陳舊的洗滌液會出現本底增高現象，也可能出現假陽性。

　　

　　16.嚴控反應時間，反應時間過長，酶失活；反應時間過短，酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結合，生成物結構松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。