免疫熒光通過特異性熒光抗體結合細胞內的生物靶標抗原,從而實現對靶標分子在細胞內的分布及定位分析。該方法可以對組織塊兒、培養細胞或單個細胞進行標記,用于分析蛋白、糖原、及生物/非生物小分子,與此同時,免疫熒光也可以DAPI、Hochest33342等其他非抗體熒光標記染料聯合使用。
免疫熒光是標記免疫技術發展zui早的一種,它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術,通過將抗體與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。步驟包括,細胞固定和通透,封閉,孵育一抗,二抗等。除了這些基本步驟,以下建議可以幫助您獲得更好的實驗結果。
用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法。用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的方法稱熒光抗原法。免疫熒光組織化學分直接法、間接法和補體法。
某些抗原可以用熒光素標記,制成熒光抗原,標記熒光素的方法與制備熒光抗體方法相同。用熒光抗原可以直接檢查細胞或組織內的相應抗體,特異性較好,敏感性較差。染色方法同熒光抗體染色的直接法。由于多數抗原難以提純或量少不昂貴,一般很少采用此法。
熒光顯微鏡是免疫熒光細胞化學的基本工具。它是由光源、濾板系統和光學系統等主要部件組成。是利用一定波長的光激發標本發射熒光,通過物鏡和目鏡系統放大以觀察標本的熒光圖像。其被廣泛的運用在生物學、醫藥研究領域。