原位雜交是在分子生物學領域應用極為廣泛的實驗技術之一,是在研究生物體發育過程中的一種極為重要的分子遺傳學的研究方法。原位雜交結合成專一的核酸雜交分子,經一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列必須具備3個重要條件:組織、細胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結合的標記物。
原位雜交能在成分復雜的組織中進行單一細胞的研究而不受同一組織中其他成分的影響,因此對于那些細胞數量少且散在于其他組織中的細胞內DNA或RNA研究更為方便;同時由于原位雜交不需要從組織中提取核酸,對于組織中含量極低的靶序列有*的敏感性,并可完整地保持組織與細胞的形態,更能準確地反映出組織細胞的相互關系及功能狀態。
熒光原位雜交技術是一種非常有用的分子細胞遺傳學工具,特別原位雜交是對一些染色體數目異常和復雜染色體異常的診斷,架起了染色體顯帶技術和分子遺傳學之間的橋梁。本文主要就熒光原位雜交技術的發展歷程、探針制備和臨床應用做一簡單的綜述。
在細胞遺傳學,分子生物學和免疫學相結合基礎上發展的一種新科學,他利用已知的核酸序列作為探針,以熒光素直接標記或以非放射性物質標記后與靶DNA結合,在通過熒光素標記,zui后在熒光顯微鏡下觀察雜交信號,從而對標本中的待測核苷酸進行定性,定位和定量分析。
原位雜交利用DNA變性后雙鏈解開變成單鏈,在事宜的溫度和離子強度下可以退火和互補DNA鏈形成異源雙鏈的原理。